توضیحات

یک تکنیک مورد استفاده در زیست شناسی مولکولی، ایمونوژنتیک و دیگر رشته های زیست شناسی مولکولی برای تشخیص پروتئین های خاص در یک نمونه عصاره بافت است. هدف از این روش شناسایی اختصاصی پروتئین هاست، ابتدا پروتئین‌های تفکیک شده بر روی ژل الکتروفورز به غشاء منتقل می‌شود و سپس از پادتنها (آنتی بادی‌ها) برای مشخص کردن پروتئین‌ها استفاده می‌شود.
به طور خلاصه، نمونه پروتئین دناتوره شده و به دنبال آن الکتروفورز ژل انجام می شود. ازیک آنتی بادی سنتتیک یا مشتق شده حیوانی (به عنوان آنتی بادی اولیه) برای شناسایی پروتئین هدف مورد نظراستفاده می شود. غشای الکتروفورز در محلول حاوی آنتی بادی اولیه شسته می شود و آنتی بادی ثانویه اضافه می شود که به آنتی بادی اولیه متصل می شود. آنتی بادی ثانویه از طریق روش های مختلفی از قبیل رنگ آمیزی، ایمونوفلورسانس و رادیواکتیویتی شناسایی می شود و امکان تشخیص غیر مستقیم پروتئین هدف مورد بررسی را فراهم می آورد. این روش در مقایسه با تست الایزا اختصاصی‌تر است ولی از حساسیت کمتری برخوردار است و چون آزمایشی نسبتاً گران محسوب می‌شود، به عنوان اولین آزمایش انجام نمی‌گیرد و بیشتر در تأیید نتایج مثبت شده تست الایزا بکار می‌رود. تست وسترن بلات در همراهی با تست الایزا٬ بیش از ۹۹٪ مورد اطمینان خواهد بود.
این روش آزمایشگاهی دارای ۳ مرحله است :
1. انتقال پروتئین به ژل الکتروفورز
2. انتقال پروتئین از ژل به غشاء نیتروسلولز
3. شناسایی پروتئین اختصاصی
تجهیزات Blotting شامل تمام اجزای مورد نیاز برای انتقال پروتئین از ژل به غشا و پردازش های بعدی غشا می باشد. وسترن بلاتینگ یک روش مورد استفاده به طور گسترده در تحقیقات و آزمایشگاه های بالینی برای تشخیص پروتئین با آنتی بادی خاص خود است. بلاتینگ نیاز به یک دستگاه یا بلاتر برای انتقال ژل به غشا در شرایط مرطوب، خشک و یا نیمه خشک دارد. پروتکل انتقال بستگی به نوع پروتئین، ضخامت ژل و نوع غشاء دارد.
پس از انتقال، پروتئین ها باید مورد بررسی، رنگ آمیزی، شستشو و شناسایی قرار گیرند. آزمایش برای اتصال و هیبریداسیون پروتئین ها و فیکساسیون آنها، به سینی های شستشو، رنگ آمیزی و رنگ زدایی غشاء ونگه دارنده ژل ها و بلات ها، نیازدارد. این فرآیند را می توان با تجهیزاتی به صورت اتوماتیک انجام داد. تجهیزات اتوماتیک می تواند شیکر، بلاک، دورگه سازی و شستشوی بلات و حتی بازیافت آنتی بادی اولیه را شامل شود.

تجهیزات لازم برای انجام وسترن بلات در انجام کارهای تحقیقاتی به صورت ساعتی اجاره داده می شود.