(HRM) یک روش قدرتمند در زیست شناسی مولکولی برای شناسایی جهش ها، پلی مورفیسم ها و تفاوت های اپی ژنتیکی در نمونه های DNA دو رشته است. این کشف و توسعه توسط آیداهو فناوری و دانشگاه یوتا انجام شد. مزایای این روش نسبت به سایر تکنولوژی های ژنوتیپی شامل:
– در مقایسه با سایر تکنولوژی های ژنتیکی مانند توالی و تایپ TaqMan SNP بسیار موثر است که کار را برای پروژه های ژنتیکی در مقیاس بزرگ ایده آل می کند.
– سریع و قدرتمند است بنابراین قادر به ژنوتایپینگ دقیق نمونه های زیاد با سرعت بالا است.
– ساده است. با یک آزمایش HRM با کیفیت خوب، ژنوتیپ قدرتمند را می توان توسط افراد غیر ژنتیسین در هر آزمایشگاه با دسترسی به دستگاه PCR قادر به انجام HRM انجام داد.
تجزیه و تحلیل HRM به منظور تشخیص تفاوت های توالی نوکلئوتیدی بین نمونه ها انجام می شود. همچنین می تواند قطعات DNA مخلوط را از یکدیگر متمایز کند ( برای ژنوتیپ SNP از افراد جهش یافته وحشی، هتروزیگوت و هموزیگوت).
سه ابزار اساسی در تحلیل HRM استفاده می شود:
1- واکنشگرهای اختصاصی PCR و رنگ های اتصال به dsDNA رنگ های کم سمیت در غلظت های بالا برای تولید منحنی های ذوب قوی که در تکثیر PCR دخالت نمی کند.
2- ابزارReal time PCR برای تشخیص حساسیت برای مقدار دقیق، شناسایی هدف و کنترل دقیق حرارتی .
3- نرم افزار سازگار با تجزیه و تحلیل HRM برای تولید و تجزیه و تحلیل پروفایل منحنی ذوب و خوشه بندی نمونه با خواص مشابه.
تحلیل HRM با توجه به سادگی آن و گردش کار مختصر، یک جایگزین مقرون به صرفه و در عین حال دقیق برای آزمون ژنوتیپ مبتنی بر پروب مانند SSCP، RFLP و توالی DNA است.
تجهیزات لازم برای انجام HRM در انجام کارهای تحقیقاتی به صورت ساعتی اجاره داده می شود.